细胞生长曲线绘制
细胞生长曲线是测定细胞绝对生长数的常用方法，也是判定细胞活力的重要指标，是培养细胞生物学特性的基本参数之一。一般细胞传代之后，经过短暂的悬浮然后贴壁，随后度过长短不同的潜伏期，即进入大量分裂的指数生长期。在细胞达到饱和密度后，停止生长，进入平顶期，然后退化衰亡。为了准确描述整个过程中细胞数目的动态变化，典型的生长曲线可分为生长缓慢的潜伏期，斜率较大的指数生长期，呈平台状的平顶期及退化衰亡4个部分。以存活细胞数(万/mL)对培养时间(h或d)作图，即得生长曲线。
【应用简介】
细胞生长曲线是测定细胞绝对生长数的常用方法，也是判定细胞活力的重要指标，是培养细胞生物学特性的基本参数之一。一般细胞传代之后，经过短暂的悬浮然后贴壁，随后度过长短不同的潜伏期，即进入大量分裂的指数生长期。在细胞达到饱和密度后，停止生长，进入平顶期，然后退化衰亡。为了准确描述整个过程中细胞数目的动态变化，典型的生长曲线可分为生长缓慢的潜伏期，斜率较大的指数生长期，呈平台状的平顶期及退化衰亡4个部分。以存活细胞数(万/mL)对培养时间(h或d)作图，即得生长曲线。
【实验原理】
典型的生长曲线即可分为潜伏期、指数生长期、平顶期及退化衰老四个部分，其中的三个不同生长时期（潜伏期、指数生长期和平顶期）是每个细胞系所共有的特征。通过测定生长曲线，不仅可以了解培养细胞生物学特性的基本参数、测定细胞绝对生长数、判断细胞活力，而且也可用于测定药物等外来因素对细胞生长的影响。本实验采用计数法测定细胞生长曲线，通过连续对细胞计数（通常为10天，一般应每次计数3孔细胞取平均值），然后以存活细胞数对培养时间作图，即得该种细胞的生长曲线。
【实验方法】
计数法：
常规消化细胞，离心收集细胞沉淀，用血清培养基悬浮细胞，制成单细胞悬液，并用进行细胞计数。
细胞计数后，将细胞浓度调整为(1~5)×104个/mL，精确地将细胞分别接种于两块24孔板中，要求每孔加入的细胞总数一致，加入的培养液量要一致。
每天取3孔细胞消化，进行细胞计数，计算平均值。一般需连续计数10天左右。从培养起开始，每3天需给未计数的细胞换液。
以培养时间为横轴，细胞浓度为纵轴，将每天所得的细胞浓度标在坐标纸上，各点连线即得细胞生长曲线。
MTT法：
常规消化细胞，离心收集细胞沉淀，用血清培养基悬浮细胞，制成单细胞悬液，并用进行细胞计数。
接种细胞：稀释细胞浓度至1×104 /ml。吸取200ul的细胞悬液加入到96孔板中（注意设置空白对照组）。
对于瞬时转染的细胞，转染后24h消化细胞，重新接种至96孔板，培养18h加药两天后进行MTT检测。
细胞培养：常规培养细胞，每两天换一次液。
呈色：从细胞培养第二天开始，即可每天按照固定时间取出96孔板并加入MTT溶液20ul，37℃培养4h后，将孔中上清小心的吸去，加入150ul的DMSO，震荡10min，使沉淀充分溶解。
在酶联免疫检测仪上设置490nm波长测定吸光值，进行检测并记录结果（取平均值）。
每天取出96孔板重复操作，并记录结果。
以时间为横坐标，吸光值为纵坐标绘制细胞生长曲线。
【注意事项】
细胞接种浓度不能过多也不能过少，在合适的浓度下细胞在7~10天内能长满而不发生生长抑制；细胞数量太少，细胞适应期太长；数重太多，细胞将很快进入增值稳定期，在一段时间内需进行传代，曲线不能准确反映细胞生长情况。同种细胞的生长曲线先后测定要采用同一接种密度，这样才能做纵向比较；不同的细胞也要接种细胞数相同，才能进行比较。
细胞生长曲线是观察细胞生长基本规律的重要方法。只有具备自身稳定性生长特性的细胞才适合在观察细胞生长变化的实验中应用。因而在细胞系细胞和非建系细胞生长特性观察中，生长曲线的测定是最为基本的指标。
细胞生长曲线虽然最为常用，但有时其反映数值不够精确，有20%~30%的误差，需结合其他指标进行分析。在生长曲线上细胞数量增加1倍时间称为细胞倍增时间，可以从曲线上换算出。细胞倍增的时间区间即为细胞对数生长期，细胞传代、冷冻等实验多应在此区间进行。
细胞在不同培养液中的细胞生长曲线和细胞倍增时间可以直接反映细胞在该种培养液内的增殖速度，是对培养液进行选择的主要依据。通过个同培养液内细胞生长曲线的差异，筛选出对成纤维细胞和上皮细胞最适合的培养液。
通过对细胞生长曲线的绘制，可比较不同的培养液对细胞生长曲线变化的影响。在条件允许的情况下，分析培养液中添加不同的生物活性物质（如生长因子、激素等）对细胞生长的影响，从而筛选出合适的细胞培养液。
