成球实验

成球实验

成球能力是肿瘤干细胞体外鉴定的一个重要方法，其判断的是单个细胞在合适的条件培养基自我更新的能力。

实验介绍

【应用简介】

成球能力是肿瘤干细胞体外鉴定的一个重要方法，其判断的是单个细胞在合适的条件培养基自我更新的能力，一般用细胞球形成效率表示。对于某些肿瘤如胶质瘤和乳腺癌，它们的肿瘤干细胞在体外条件培养时相对较容易形成细胞球，而另一些上皮肿瘤如肝癌、结肠癌等则相对成球困难些。

【技术原理】

肿瘤干细胞能分化出不同表型，具有不断自我更新和分化能力，在添加了生长因子的无血清培养基中能培养形成细胞球。

【实验方法】

Step1：细胞培养；

Step2：细胞转染或药物处理；

Step3：将细胞接种于超低粘附培养板中，以成球培养基培养；

Step4：图片采集。

处理组细胞成球较对照组小，说明该处理因素能抑制细胞成球。

技术总结

在细胞成球实验过程中需配制成球专用培养基，所用细胞培养板为超低黏附培养板。细胞接种密度需要自己摸索。低密度常用于原代肿瘤干细胞的提取，筛选可以非粘附生长的细胞。高密度用于细胞球的扩增，一般来说5000/ml以上。培养过程中无需换液，隔2-3天补液即可。