TTC染色

TTC染色

TTC染色是TTC和活细胞线粒体内的琥珀酸脱氢酶反应，生成红色的甲臜，用来表示细胞的活力。它是评价脑缺血损伤常用的指标。

【应用简介】

TTC染色是TTC和活细胞线粒体内的琥珀酸脱氢酶反应，生成红色的甲臜，用来表示细胞的活力。它是评价脑缺血损伤常用的指标。

【实验原理】

TTC（2，3，5—氯化三苯基四氮唑）是脂溶性光敏感复合物，它是呼吸链中吡啶—核苷结构酶系统的质子受体，与正常组织中的脱氢酶反应而呈红色，而缺血组织内脱氢酶活性下降，不能反应，故不会产生变化呈苍白。故可以用来染色检测哺乳动物组织的缺血梗塞。

【实验方法】

Step1：取脑：可麻醉后直接取脑或经生理盐水灌注后取脑。因为脑组织未用多聚甲醛固定，所以较软，取脑时更应仔细，保持大脑的完整性；

Step2：-20℃冰箱中速冻20分钟左右，便于切片；

Step3：切片：一般切成5－6片，每隔2mm切一片。第一刀在脑前极与视交叉连线中点处；第二刀在视交叉部位；第三刀在漏斗柄部位；第四刀在漏斗柄与后叶尾极之间。如果需计算面积的话，应切得均匀或用专门的脑槽；

Step4：将切片置于2%TTC中；

Step5：用锡箔纸盖住后，放入37℃温箱15～30min，不时翻动脑片，使均匀接触到染色液；

Step6：取出切片后摆放整齐拍照。

【常见问题】

1、染色过浅：染色时间不够，适当延长染色时间；

2、切片破碎：取材不当，取脑时更应仔细，保持大脑的完整性。或速冻时间不够，切片时组织过软，适当延长冷冻时间。

【注意事项】

1、因为脑组织未用多聚甲醛固定，所以较软，取脑时更应仔细，保持大脑的完整性；

2、切片时第一刀在脑前极与视交叉连线中点处；第二刀在视交叉部位；第三刀在漏斗柄部位；第四刀在漏斗柄与后叶尾极之间。如果需计算面积的话，应切得均匀或用专门的脑槽。

[送检与交付标准]