GUS染色

GUS染色

GUS染色的实验目的是对植物样本进行染色，因为绝大多数植物细胞内不存在内源GUS活性，因此GUS基因广泛用作转基因植物的报告基因。

【应用简介】

GUS染色的实验目的是对植物样本进行染色，因为绝大多数植物细胞内不存在内源GUS活性，因此GUS基因广泛用作转基因植物的报告基因。

【实验原理】

GUS（β-glucuronidase，β-D-葡萄糖苷酸酶）基因是目前常用的一种报告基因，其表达产物β-葡萄糖苷酸酶是一种水解酶，能催化许多β-葡萄糖苷酯类物质的水解，它可以将5-溴-4-氯-3-吲哚-β-葡萄糖苷酸酯（5-bromo-4-chloro-3-indolyl-glucronide，缩写为X-Gluc）分解为蓝色物质。

【实验方法】

（1）组织化学染色定位方法

（2）荧光法测定GUS活性

（3）分光光度法测定GUS活性

案例展示

以某植物样本为例：

step1:90%丙酮固定20min;

(丙酮(acetoue)涉透力很强，能使蛋白质沉流凝固，但不影响蛋白质的功能基团而保存鼻的活性，用于固定磷酸酶和氧化酶效果较好，因此可用于GUS染色前的固定，可防止GuS信号的扩散。铁点是固定快。渗透力强，易使组织细胞收缩。保持细胞结构欠佳。一般4C下20分钟为直)

Step2:加1mLGUS洗液洗去丙酮，洗2遍:

Step3:加GUS染色液，冰上抽真空15-20min;

Step4:37C放置，隔一阵观察--下，染上色了就进行下面步骤:

Step5:吸出染色液，加入1mL70%乙醇，停止染色反应及脱色:

Step6:更换几次乙醇直到脱色完全;

Step7:解剖镜及显微镜拍照观察

载玻片上加适量HCG透明液，用镊子取出幼苗在透明液中铺平，盖上盖玻片，解剖镜观察整株，显微镜观察细节并拍照。

[送检与交付标准]

[交付标准]

1.实验报告

2.真实实验结果

3.原始图片

4.实验原始数据

5.剩余物料在周期内可返还（超过周期，不予返还）

[送检标准]