免疫组化

IHC染色/免疫组化

抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及相对定量。

【应用简介】

抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及相对定量。

【实验原理】

抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及相对定量。

【实验流程】

      1、在60°烤箱烤片30~60min，这一步是为了使蜡片水分蒸发和石蜡融化，好让组织切片牢固贴在玻片上。做切片是免疫组化的前提切片子最好是找专业培训郭的人员切片，片子的厚薄均匀，切片的完整，无褶无刀痕。

      2、脱蜡水化，依次放入二甲苯I、II、III各10min，乙醇梯度（高至低）各2min，水。然后用自来水洗一下，但不要直接对着切片冲洗。

      3、抗原修复，小编用的是高压热修复，ph6.0的柠檬酸盐缓冲液，一定要全部浸泡切片，等高压锅冒气后5min结束，自然冷却，温度剧降可能引起脱片。3%H202避光浸泡15min。

      4、用免疫组化油笔围绕组织画圈，接下来就能看见它的功效了。PBS洗5min*3次。PBS会被锁在画的圈中，不会流干，保证不干片。

案例展示

                  TWEAKR FN14-1 300-20X                                  免疫组化/荧光（组织/细胞）                       

【常见问题】

1、无/弱染色

烤片温度过高，推荐56℃-60℃1-2h；

一抗是否适用固定液和石蜡切片，使用浓度是否过低，孵育是否时间过短等。

2、非特异性背景染色

是否灭活内源性过氧化物酶；

孵育过程中干片；

抗原热修复过度。

3、染色过深

一抗浓度过高；

染色试浓度过高或孵育时间过长；

染色剂浓度过高或孵育时间过长。

【注意事项】

1、使用3%过氧化氢溶液消除内源性过氧化酶活性时，请勿孵育过长时间，一般为5—10分钟；

2、对于较易产生脱片的部分组织如皮肤、骨组织、脑组织等尽量避免使用微波修复和高压修复，减少其脱片的风险；

3、使用DAB显色时，显色剂停留时间过长会造成染色过深，可根据实验温度及实验结果适当调整染色时间。

[送检与交付标准]