蛋白质双向电泳

蛋白质双向电泳是将蛋白质等电点和分子量两种特性结合起来进行蛋白质分离的技术。蛋白质双向电泳的第一向为等电聚焦( Isoelect rofocusing ,IEF) , 根据蛋白质的等电点不同进行分离; 第二向为SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳( SDS-PAGE ) , 按亚基分子量大小进行分离。经过电荷和分子量两次分离后, 可以得到蛋白质分子的等电点和分子量信息。简明地理解，第一项进行等电聚焦，蛋白质沿pH梯度分离，至各自的等电点；随后，再沿垂直的方向进行分子量的分离。

蛋白质双向电泳实验注意事项：

1.TCA：TCA有毒性，有刺激性气味，损害呼吸道、眼睛及皮肤，称量时应戴手套及口罩，避免沾到皮肤及吸入，若不慎接触，应立即用大量水冲洗后就医。TCA易潮解，称量时应迅速。

2.PMSF：PMSF有剧毒，严重损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤，称量时应戴手套及口罩，避免沾到皮肤及吸入，若不慎接触，应立即用大量水冲洗后就医。PMSF溶于异丙醇后置于-20℃长期保存，保存中易析出结晶，用前取出待结晶溶化后再使用

3.甲醛：有刺激性气味，易挥发，其蒸汽强烈刺激粘膜、眼睛，具有致癌性。使用时应戴手套及口罩，在通风橱内操作。

4.甲醇：有毒，能引起失明。DTT：很强的还原性，散发难闻的气味。可因吸入、咽下或皮肤吸收危害健康。当使用固体或高浓度储存液时，戴手套和护目镜，在通风橱中操作。beta-巯基乙醇：可致命，对呼吸道、皮肤和眼睛有伤害。丙酮：对神经系统有麻醉作用，并对黏膜有刺激作用