蛋白质纯化

蛋白纯化是生物研究常用的一种技术，是指从蛋白混合物中得到纯度较高的某种蛋白的过程。

1、离子交换层析

离子交换色谱是利用离子交换剂上的可交换离子与周围介质中被分离的各种离子间的亲和力不同，经过交换平衡达到分离目的的一种纯化方法。

2、疏水层析亦称疏水作用层析(hydrophobic interaction chromatography，HIC)，是利用盐 -水体系中样品组分的疏水基团和固定相的疏水配基之间的疏水力不同，而使样品组分得以分离的一种层析方法。

3、亲和纯化是利用待分离物质和它的特异性配体间的特异亲和力，达到分离目的的一类纯化技术。这里主要介绍His/GST亲和纯化原理和实验步骤(流程)。

4、凝胶过滤色谱又称分子筛，蛋白纯化方式之一。是应用蛋白质分子量或分子形状的差异去进行分离的一项纯化技术。

5、分子筛HPPLC，又称为体积排阻色谱(SEC, size exclusion chromatograghy)，小分子量的化合物进入凝胶孔中，滞留时间长；大分子量的化合物不能进入空中，会更早的被洗脱下来。分子筛色谱的优势在于能够处理至少1nmol的目的蛋白，并得到很好的分离效果，分离时间也很短，一般在3个小时以内，同时获得的层析分离峰也更小。

样品要求：

蛋白或肽的总浓度应不低于0.5μg/μl，体积不少于50μl，如果样品需要脱盐或有样品浓缩的需要，需要对缓存液的成分进行说明。