miRNA检测miRNA检测 MicroRNA（miRNA）是一类长度约19-24nt的非编码单链RNA，通过碱基互补配对的方式与靶基因的3’-UTR区部分或完全互补，剪切靶基因的转录产物或者抑制转录产物的翻译，从而起到转录后调控靶基因表达的作用。它广泛存在于动物、植物、真菌及病毒的基因组中，调控生物体生长发育和疾病发生等过程中相关基因的表达。 MiRNA的异常表达可能会导致生理状态的异常和疾病的产生，在多种癌症中，miRNA的表达水平会发生明显改变，有可能起到原癌基因和抑癌基因的作用。此外，在许多其他的病变组织和细胞中也检测到了miRNA的异常表达。miRNA的检测对于生物学的基础研究以及疾病的分子诊断和治疗具有重要意义。 1.Northern印迹法 Northern印迹法不需要专门的设备，基本原理如下:RNA样本由限制性内切酶消化,通过琼脂糖凝胶电泳分离,变性后根据其在凝胶中的位置转移到硝酸纤维素膜或尼龙膜上，固定后与同位素或其他标记探针反应。洗涤探针后，可以通过放射自显影或其他合适的技术检测到miRNA。 Northern印迹虽然可以检测miRNA的相对分子大小和丰度，但其也存在低通量、耗时长、易降解等缺点，并且敏感度较低，无法检测到分子量较低的miRNA。 2．MicroRNA Array 利用集成在384孔板上的引物和探针组合来检测人类、大鼠或小鼠的miRNA表达谱，只需1个工作日就能产生覆盖Sanger miRBase的综合数据集。采用TaqMan探针原理，结果准确可靠，样品无需做重复试验。 3．特定类型疾病miRNA表达检测 MiRNA的表达检测对监测肿瘤的发生发展和各种治疗手段的效果有重要意义，作为指导个体化药物选择的生物标记具有很大的临床应用潜力。我们针对肝癌、胃癌、胰腺癌等多种肿瘤相关标志性miRNA进行荧光定量检测。 |
