支原体检测

支原体检测

       支原体是细胞外生存的最小微生物，是一类缺乏细胞壁的原核细胞型微生物，呈高度多形性，有球形、杆形、丝状、分枝状等多种形态。通过对支原体特定的序列设计引物，当存在支原体污染时通过PCR特异性扩增，会将目标DNA特异性地复制，然后通过琼脂糖电泳检测，会跑出条带出现阳性结果。反之当没有支原体污染时，由于没有模板，PCR无法扩增，则琼脂糖电泳跑不出条带，出现阴性结果。

【应用简介】

       支原体是细胞外生存的最小微生物，是一类缺乏细胞壁的原核细胞型微生物，呈高度多形性，有球形、杆形、丝状、分枝状等多种形态。通过对支原体特定的序列设计引物，当存在支原体污染时通过PCR特异性扩增，会将目标DNA特异性地复制，然后通过琼脂糖电泳检测，会跑出条带出现阳性结果。反之当没有支原体污染时，由于没有模板，PCR无法扩增，则琼脂糖电泳跑不出条带，出现阴性结果。

【实验原理】

       原核生物的rRNA碱基序列非常保守，而rRNA操纵子上编码rRNA的DNA间隔区如16S和23S间隔区，各种生物种间的碱基序列差别很大。这个间隔区的 DNA序列及长度在 Mycoplasma 各个种间既有相对保守的部分，也有具有很大差异的部分。本制品是在编码 16S 和 23S rRNA 的 DNA 上设计一对 F1/R1 引物，扩增编码 16S 和 23S rRNA 的 DNA 间隔区。此反应体系只特异性扩增 Mycoplasma DNA，检出灵敏度与特异性都很高。

通过对支原体特定的序列设计引物，当存在支原体污染时通过PCR特异性扩增，会将目标DNA特异性地复制，然后通过琼脂糖电泳检测，会跑出条带出现阳性结果。反之当没有支原体污染时，由于没有模板，PCR无法扩增，则琼脂糖电泳跑不出条带，出现阴性结果。

【实验流程】

【常见问题】

1、取待检样本：

一般是接种后进行 3-6d细胞培养的培养上清液；

如果使用 Eagle 等常用的细胞培养基时，培养上清可直接加入到 PCR 反应液中；

如果使用细胞悬浊液作为样品，则需要提取 DNA，再进行 PCR 反应。

2、一定要设置阳性对照（一般采用带有支原体特异片段的质粒）与阴性对照（H2O）；

3、配制PCR反应体系时需在超净工作台里进行，避免污染。

送检与交付标准