稳定表达细胞系构建 (stable Cell Line Establishment)

稳定表达细胞株构建

稳定表达细胞株主要应用于以下研究中：

1）需要长期在目的细胞中研究基因功能。通过构建稳定株，可以大大降低频繁转染或者病毒包装的成本，也方便长期的实验研究；

2）表达抗体的稳定表达细胞株可以用于稳定表达所需要的抗体，为后期抗体生产提供必要条件；

3）需要用目的细胞构建动物模型的实验，往往需要构建成稳定株。

【应用简介】

稳定表达细胞株主要应用于以下研究中：

1）需要长期在目的细胞中研究基因功能。通过构建稳定株，可以大大降低频繁转染或者病毒包装的成本，也方便长期的实验研究；

2）表达抗体的稳定表达细胞株可以用于稳定表达所需要的抗体，为后期抗体生产提供必要条件；

3）需要用目的细胞构建动物模型的实验，往往需要构建成稳定株。

【实验原理】

将外源DNA克隆到具有某种抗性的载体上，载体被转染到宿主细胞并整合到宿主染色体中，用载体中所含的抗性标志进行筛选。最常用的真核表达载体的抗性筛选标志物有新霉素（Neomycin）、潮霉素（Hygromycin）和嘌呤霉素(Puromycin)，筛选得到可稳定表达目的蛋白，或者稳定表达沉默特定基因的细胞株。 慢病毒几乎可以感染所有种类的细胞，并且在感染后可以整合到受感染细胞的基因组，进行长时间的稳定表达，因此，慢病毒常用于制备稳定表达/沉默特定基因的单克隆细胞株。

【实验方法】

1）目的细胞的合适抗生素浓度筛选，

2）目的细胞的合适病毒滴度筛选，

3）慢病毒构建与包装与慢病毒感染，

4）特定抗生素筛选稳定表达细胞株，

5）稳定表达细胞株鉴定。