Western blot

Western blot

蛋白质印迹法（免疫印迹实验）即Western Blot。它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中表达情况的信息。

【应用简介】

蛋白质印迹法（免疫印迹实验）即Western Blot。它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中表达情况的信息。

【实验原理】

蛋白免疫印迹（Western Blot）是将电泳分离后的细胞或组织总蛋白质从凝胶转移到固相支持物NC膜或PVDF膜上，然后用特异性抗体检测某特定抗原的一种蛋白质检测技术，现已广泛应用于基因在蛋白水平的表达研究、抗体活性检测和疾病早期诊断等多个方面。

【实验方法】

Step1: 蛋白样品裂解，细胞需提前裂解

Step2: SDS-PAGE凝胶电泳

Step3: 转膜

Step4: 免疫反应

Step5: 化学发光

Step6: 结果分析

技术总结

【注意事项】

1、当进行接触滤纸、凝胶和膜的操作时，应戴手套。手上的油脂会阻断转移。

2、滤纸、胶、膜之间千万不能有气泡，气泡会造成短路。

3、因为PVDF膜的疏水性，膜必须首先在甲醇中完全浸湿。而且在以后的操作中，膜也必须随时保持湿润（干膜法除外）。

4、滤纸可以重复利用，上层滤纸（靠膜）内吸附有很多转移透过的蛋白质，所以上下滤纸一定不能弄混，在不能分辨的情况下，可以将靠胶滤纸换新的。

5、转移时间一般为1.5小时，( 1mA-2mA/cm2，10% gel)，可根据分子量大小调整转移时间和电流大小。

送检流程与交付标准