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Dot Blot

Dot Blot

        Dot Blot(斑点杂交或缝隙印迹)是分子生物学中用于检测生物分子,检测、分析和鉴定蛋白质/核酸的一种技术。它是对Northern blot、Southern blot或Western blot方法的简化。


【实验原理】

       在斑点杂交中,要检测到的生物分子不是首先通过电泳分离出来的,相反,将含有被检测分子的混合物直接点在膜上,烘烤固定。然后用核苷酸探针(Northern blotSouthern blot)或抗体(Western blot)杂交后检测。这种方法耗时短,可做半定量分析。一张膜上可同时检测多个样品。


【实验方法】

1DNA斑点杂交

.先将膜在水中浸湿,再放到15×SSC中。

.DNA样品溶于水或TE,煮沸5min,冰中速冷。

.用铅笔在滤膜上标好位置,将DNA点样于膜上,每个样品一般点5μl2-10μg DNA)。

.将膜烘干,密封保存备用。

2RNA斑点杂交:

与上法类似,每个样品至多加10μgRNA(经酚/氯仿或异硫氰酸胍提取纯化),方法是将RNA溶于5μl DEPC水,加5μl甲醛/SSC缓冲液(10×SSC中含6.15mol/L甲醛),使RNA变性,然后取5-8μl点样于处理好的滤膜上,烘干。

3)蛋白斑点杂交:

①先将PVDF膜在甲醇中浸湿,再放到PBS中,然后用滤纸吸干表面水渍。

②将蛋白样本变性处理,取2μl点样于膜上,烘干。


案例展示

如图。


送检与交付标准

【交付标准】

1. 实验报告

2. 真实实验结果

3. 原始图片

4. 实验原始数据

5. 剩余物料在周期内可返还(超过周期,不予返还)


【送检流程】

样品类型

样品需求

保存条件

运输条件

备注

动物组织

单个样品>0.1g2mlEP管或冻存管装,不要过量;样本应尽量新鲜,如不能立即提取蛋白或核酸,应液氮速冻后冻存于-80或更低,冻存样本避免反复冻融以致降解

-80

干冰

所有样本均须有唯一标记,且标记清晰可识

种子样本

去壳新鲜或保存于液氮中的的种子样本,单个样品>0.2g

-80

干冰

贴壁/悬浮细胞

1. 总RNA或蛋白:106cell/指标、浆/核RNA或蛋白:107cell/指标、线粒体RNA或蛋白:2*107cell/指标,样本尽量新鲜,细胞收取后直接加Trizol(QPCR检测)或直接冻存于-80

-80

干冰

2. 若细胞处理(加药、转染、感染)后状态差应酌情加大收样量

全血/血清样品

用抗凝管保存的外周血 5~10ml,骨髓 1~3ml -80保存不超半周的白细胞匀浆>400μl,每 400μl 加入 400μl Trizol

-80

干冰

石蜡包埋样品

由标准的石蜡包埋盒包埋的石蜡块,有效厚度大于 0.1cm新鲜的 FFPE 组织切片,每片厚度不超过 10μm2~8 张,表面积不超过 250mm2

-20

冰袋

抗体

1. 按样本种属提供满足相应实验要求的抗体;

-20

冰袋

2. 按抗体说明书要求寄送,尽量避免分装;如分装,确保量足够进行实验,并提供抗体说明书。

3.保存抗体的抗体管上应有能够识别此抗体的标记,抗体的量应大于实验所需的量。

引物

干粉,≥1OD,如进行预实验,每个基因至少提供两对引物,附带公司引物合成单。

-20

冰袋或常温

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初源云医疗专注于医学科研版块,业务涵盖细胞基因修饰、病毒包装、合成生物学、单细胞测序、蛋白质组学、基因编辑动物、药品上市后药效研究等科研技术服务和成果转化。 基石启航医疗与香港基石生物、探罕科学研究有限公司、松诺生物及香港科技大学、沈阳医学院等国内外知名机构有着深度合作关系,旨在促进资源共享和技术交流,加速研究成果的转化和应用
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