常见问题 | 原因 | 建议 |
转染效率低 | 细胞状态差或不恰当的细胞密度 | 接种生长状态良好的细胞，按转染试剂要求的最适密度接种细胞。 |
优化转染条件 | 例如优化阳离子脂质体试剂和DNA的量。 |
DNA-阳离子脂质体试剂复合物在存在血清的条件下形成 | 在复合体形成时不要使用血清。 |
转染体系中是否存在抑制剂 | 不要在用于制备DNA-阳离子脂质体复合物的培养基中使用抗生素、EDTA、柠檬酸盐、磷酸盐、RPMI、硫酸软骨素、透明质酸，厂硫酸葡聚糖或其他硫酸蛋白多糖。 |
阳离子脂质体试剂冻结 | 不要使用冻结的或储存温度低于4℃的阳离子脂质体试剂。 |
质粒纯化的问题 | 使用转染级的质粒纯化试剂盒。 |
细胞死亡率高 | DNA量太高 | 作一个剂量-反应曲线以确定最佳的DNA量。在剂量-反应转染中加人阳离子脂质体试剂，因为单独DNA也会对细胞生长有一个基础的影响。 |
阳离子脂质体试剂量太高 | 作一个剂量-反应曲线以确定最佳的阳离子脂质体试剂的量。在剂量反应转染中加入DNA,因为单独阳离子脂质体试剂也只对细胞生长有一个基础的影响。 |
在转染过程中使用抗生素 | 在转染过程中不要使用氯霉素、青霉素或链霉素，因为阳离子脂质体试剂使细胞更敏感。 |
细胞太少 | 作一个剂量-反应曲线以确定每个转染过程中最佳的细胞数量。根据您的应用所要求的效率调整细胞数量。 |
阳离子脂质体试剂氧化了 | 不要过分搅动或振荡阳离子脂质体试剂，这可能会形成阳离子脂质体试剂的过氧化物。 |
对于稳定转染，筛选抗生素加人太快或浓度太高 | 在加入筛选性抗生素前至少要在不含G418的培养基中培养48h,使细胞表达抗性基因。 |
转染重复性不好 | 转染时的融合度波动 | 不同批次的转染时保持所有的转染参数恒定，如融合度、传代次数和生长时间相等。 |
在培养过程中细胞发生变化 | 如果可能，使用来源于经选择转染效率较高的亚系细胞;如果可能，用新融化的细胞进行实验。 |
