常见问题 | 原因 | 建议 |
迁移/侵袭实验中细胞未能迁移至基底室 | 选择的膜孔径偏小 | 确保选择合适孔径的膜，可以尝试更大孔径的膜。 |
ECM铺得太多 | 过多的ECM可能会堵住孔，尝试使用少量ECM或者其它种类的ECM。 |
气泡聚集 | 小室下面的气泡会妨碍细胞迁移，导致局部无细胞迁移。可以先放入小室，再先加培养基，避免气泡产生。 |
对细胞没有进行饥饿处理，以及需要设置上下室培养基的FBS浓度梯度 |
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对细胞的刺激没有促迁移作用 | 确保采用适合该细胞迁移的刺激以及正确的浓度。设置明性和阳性对照组。 |
细胞传代次数太多 | 随着衰老和代数增加，细胞形态会发生一些变化。复苏代数靠前的细胞重新开始实验。 |
实验所用的细胞系不正确 | 确保使用正确的细胞系以及正确的刺激浓度。设置阴性和阳性对照组。 |
迁移/侵袭实验中，对照组和测试组之间没有差别 | 细胞传代过多 | 复苏代数靠前的细胞，重新开始实验。 |
移去培养基的顺序有误（基底室和上室） | 使用合适的对照，检查添加/替换的顺序是否会影响实验结果。 |
使用的膜孔径大小不合适，太大或太小都会导致细胞很容易迁过去或者很难迁移 |
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小室膜的上层擦拭不充分 | 一些实验只需要观察基底面的细胞，但是两面的细胞会被染上色并检测到，所以要擦去上层。 |
显微镜下观察不到细胞 | 膜的类型不适合显微镜观察 | 不是所有膜的材质或孔径大小都适合于显微镜观察。查看说明书以找到推荐合适的膜。悬挂式只有1uM是透明的；站立式只有PTFE膜透明。 |
迁移/侵袭实验中，染色后的结果较难分辨是否为迁过去的细胞 | 背景太脏 | 使用干净的试剂，操作过程中不要带入杂质，确保背景干净，不会干扰显微镜观察。 |
Millicell小室是多孔径滤膜，染色后显微镜下会看到很多被染上色的圆孔，这是膜的微孔，不是细胞，只有具有明显拉长、扩张等迁移状态的染色才是细胞 |
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培养时间过短 | 如果很多细胞只染到核，没有拉伸的细胞形态，则提示迁移的时间可能不够，需要延长时间。 |
细胞贴壁不好 | 实验所用的细胞可能需要不同的培养基或者添加物 | 根据ATCC建议，再次确认细胞所需要的培养基成分和所需添加物。 |
细胞可能需要ECM | 种细胞前，铺一层合适的ECM。 |
细胞可能需要另一种ECM | 如果细胞贴壁需要ECM，确保使用的ECM是最合适的，而且浓度正确。 |
起始细胞密度不正确 | 尝试增大或者降低起始细胞密度。 |
